GB/T 18641-2018伪狂犬病诊断方法.pdf

ICS 11.220 B 41 国 中华人民共和国国家标准 G~/ T 18641-2018 代替 GB/T 18641- 2002 伪狂犬病诊断方法 Diagnostic method for pseudorabies 2018-09-17 发布 2019-04-01 实施 国家市场监督管理总局峪非 中国国家标准化管理委员会 0(.. I (J GB/ T 1864 1-20 18 目u 昌 本标准按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准代替GB/T 18641-2002《伪狂犬病诊断技术》。 与 GB/T 1 8641-2002 相比， 主要技术变化 如下： 增加了检测猪伪枉犬病病毒： gB 抗体的阻断ELISA 方法； 一一增加了检测伪狂犬病病毒野毒 gE-PCR方法。 本标准由中华人民共和国农业农村部提州。 本标准由全同动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC 1 81） 归｜二｜ 。 本标准起草单位：华中农业大学、中国动物卫生与流行病学中心。 本标准主要起草人：何启盖、库旭钢、吴斌、陈品、方六荣、李晓戚、姜雯、，需宪荣、范盛先、刘正飞、 吴发兴、吴美洲、陈焕春。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： 一一－GB/T 18641- 2002 0 I GB/T 18641-2018 5.4.4 操作步骤 5.4.4. 1 稀释待检血清 用样品稀释液将待检J(II. 清、阴性1(11. 清、阳性l(IL 清作 l : l 倍稀释（即 100 µL J(II 请加 100 µL 稀释液）， 其中阴性1(11. 清、阳性1(11. 清等分别做2 个重复，分别标记为 A1 、 A2 和 B1 、民。 5.4.4.2 血清孵育 将稀释1(11. 清 100 /.LL 加入抗原孔中，18 ℃～26 ℃作用 1 h。 5.4.4.3 洗涤 甩掉板孔中的溶液，每孔加 300 µL洗涤液，洗涤3 次。 5.4.4.4 加入酶标抗体 加入辣根过氧化物酣标记的抗猪伪狂犬病病毒 gE 单克隆抗体，室报(18 ℃～26 。C）作用 20 min , 洗涤3 次。 5.4.4.5 加入底物 每孔方i1 入 100 µL TMB 底物洛液，室imi 脏光显色 15 min 5.4.4.6 终止反应 50 (LL 终止液终止反应。 每孔加入 5.4.4.7 读取眼光度值（006 50 ) 在雨标仪土． 于 650 nm 波民条件下测定吸光度值。 5.4.4.8 结果计算和判定 5.4.4.8.1 对照组中，阴性1 (11. 清平均 OD值减去阳性l(IL 清平均 OD 值之差大于0. 30 时，试验有效。 5.4.4.8.2 按式（3）计算待检1(11. 清样品 OD6so 与阴性对照血清 OD650 之比CS/N） 值： sc V