稳态荧光分析方法与应用进展.ppt

左上：天然琥珀三维荧光光谱；右上：热处理琥珀；左下：热处理琥珀右下：热填充处理琥珀稳态荧光分析方法与应用进展北京大学化学学院邹明健许潇李娜2009年1月9日TheDiscoveryandDevelopmentoftheGreenFluorescentProtein,（GFP）绿色荧光蛋白2008诺贝尔化学奖OsamuShimomura1960sMartinChalfie1990sRogerY.Tsien’s,today分子荧光产生机理-JablonskiDiagram荧光分光光度计结构示意图透射光氙灯(或高压汞灯）（200-800nm)吸收光谱荧光强度随光谱变化荧光寿命荧光光谱成像（荧光物质在样本中分布的空间信息）强度寿命荧光信号分子结构信息：荧光发射波长，荧光寿命，大分子表面荧光物质的荧光强度随溶剂极性的变化等等01分子浓度信息：荧光强度增强或猝灭02分子在溶剂中的状态：荧光光谱的红移或者蓝移，静态或动态猝灭，荧光寿命的变化等等03分子间的相互作用：荧光猝灭，荧光寿命，共振能量转移、新的荧光峰的产生04分子的大小：分子的转动速度对偏振光的消偏等05可获得的信息一般稳态荧光仪的功能2D荧光光谱：荧光强度-激发（发射）波长3D-荧光光谱：激发波长-发射波长-荧光强度同步荧光光谱（固定Dl）：以一定波长差同时扫描激发和发射单色器，Dl=Stokes位移;荧光强度-激发（发射）波长共振光散射(固定Dl=0nm)荧光偏振技术：平面偏振光激发样品。荧光动力学方法导数荧光方法三维荧光分析方法应用

?天然与人工处理琥珀的三维荧光光谱亓利剑等，宝石和宝石学杂志，2005，7卷，1期，10-16天然琥珀热处理琥珀热处理琥珀热填充处理琥珀01多环芳烃和生物大分子的检测小分子与蛋白相互作用的热力学研究恒波长同步荧光分析02多环芳烃的检测恒能量同步荧光分析03天然产物检测高背景体系中微量组分的检测可变角同步荧光分析同步荧光分析方法的应用生活污水的同步荧光谱(SFS)研究(lex=248nm)Wat.Res.Vol.29,No.6,pp.1599-1602,1995SettledsewageFinaleffluentSettledsewageFinaleffluentFilteredsewageTyrosinCinnamicacidHumicacidTyrosinHumicacidTri-distilledwaterFLUVabsorptionFLSFS,Dl=20nmSFS,Dl=20nm280nm280nmβ-carotene在表面活性剂中的同步以及3D荧光光谱unpublishedresults大气样品中对苯二酚与间苯二酚的同步荧光测定AnalBioanalChem(2004)378:1648–1651Dl=15nm1993年Pasternack等用共振光散射技术研究了卟啉类化合物在核酸上的聚集，首次将该技术应用于分析化学。光散射共振光散射λLS≈λAbs黄承志等利用光散射技术研究了生物大分子体系的散射光谱。共振光散射原理和应用金纳米(AuNPs)共振光散射测定糖原AuNPsAuNPs和500ng?mL-1糖原?+?KAuGnKChSnTalanta76,1207-1211,2008.J.Phys.chem.B(accepted)共振光散射研究亚甲基蓝(MB)在核酸

分子骨架上的组装MB在DNA分子骨架上的组装DNAmg/mL0481.2Huangetal,Bull.Chem.Soc.Jpn,72,1501-1508(1999)TheRLSspectrapfMBwithDNA(pH8.14)1234*左上：天然琥珀三维荧光光谱；右上：热处理琥珀；左下：热处理琥珀右下：热填充处理琥珀