白色念珠菌感染论文热休克蛋白90核酸疫苗.doc

白色念珠菌感染论文：热休克蛋白90核酸疫苗 【提示】本文仅提供摘要、关键词、篇名、目录等题录内容。为中国学术资源库知识代理，不涉版权。作者如有疑义，请联系版权单位或学校。 【摘要】白色念珠菌是一种机会性病原体，通常栖居于正常人口腔、上呼吸道、肠道及阴道，数量较少，不引起疾病。当机体免疫系统防御力下降时，白色念珠菌在皮肤和粘膜快速繁殖（称为浅表性白色念珠菌感染），扩散至血液和内脏器官（称为系统性白色念珠菌感染），进而引起各种病变。对于白色念珠菌感染的治疗主要是通过一些抗真菌的药物，但对于系统性白色念珠菌感染，服用抗真菌药物后仍有70%的死亡率。通过开发白色念珠菌疫苗，激发宿主免疫系统，增强机体的免疫能力，为白色念珠菌感染的预防和治疗带来了新的思路。核酸疫苗与传统疫苗相比，具有高效、价廉、安全性高等优点，在2005年已经有3种核酸疫苗在临床实验中获得了成功而且投入到大规模的生产中。白色念珠菌在不利条件下能分泌热休克蛋白90（HSP90），该蛋白同时也是白色念珠菌的免疫优势抗原。通过免疫印迹法证明，在HSP90的碳末端有3个连续的表位，即表位C、表位B和表位H，其中表位C和表位H具有免疫活性。本实验表达了含有白色念珠菌HSP90表位C的重组蛋白rP-HSP90C和构建了含有该表位的核酸疫苗pD-HSP90C,并对该核酸疫苗的免疫学活性进行了初步分析。将含有白色念珠菌HSP90表位C基因的重组质粒pET-28a/HSP90C导入大肠杆菌中经过诱导表达、纯化获得rP-HSP90C，利用白色念珠菌感染者的抗血清和rP-HSP90C免疫ICR小鼠获得的抗血清对rP-HSP90C进行Western Blot分析,证明rP-HSP90C成功表达，且其具有较好的免疫学活性，为核酸疫苗pD-HSP90C的免疫学活性分析奠定了基础。将含有白色念珠菌HSP90表位C的基因插入载体pcDNA3.1(-)中，构成核酸疫苗pD-HSP90C，通过肌肉注射pD-HSP90C后立即电穿孔的方式免疫ICR小鼠，获得抗血清，进行WseternBlot实验分析该核酸疫苗的免疫活性，该论文为进一步开发白色念珠菌核酸疫苗奠定了基础。 【关键词】白色念珠菌感染；热休克蛋白90；核酸疫苗； 【篇名】白色念珠菌热休克蛋白90表位C核酸疫苗的构建及其免疫学活性初探 【目录】白色念珠菌热休克蛋白90表位C核酸疫苗的构建及其免疫学活性初探 摘要 4-5 Abstract 5 目录 6-8 第一章 文献综述 8-15 1.白色念珠菌感染及免疫机制研究进展 8-14 1.1 色念珠菌细胞壁参与其感染免疫 8-9 1.2 白色念珠菌感染机制研究进展 9-11 1.3 白色念珠菌热休克蛋白 11-12 1.4 白色念珠菌疫苗的研究进展 12-14 2.本论文的内容及意义 14-15 第二章 实验材料与方法 15-25 1 实验材料 15-16 1.1 质粒和菌株 15 1.2 实验动物 15 1.3 主要药品与试剂 15 1.4 主要实验仪器 15-16 2 实验方法 16-25 2.1 基本实验操作方法 16-22 2.2 重组蛋白 rP-HSP90C 的表达 22-24 2.3 核酸疫苗 pD-HSP90C 的构建及免疫活性分析 24-25 第三章 实验结果与分析 25-34 1. 重组蛋白 rP-HSP90C 的表达 25-31 1.1 重组质粒 pET-28a/HSP90C 的酶切鉴定结果 25-26 1.2 重组质粒 pET-28a/HSP90C 插入基因片段的序列测定 26 1.3 重组蛋白 rP-HSP90C 的诱导表达 26 1.4 重组蛋白 rP-HSP90C 的可溶性分析 26-28 1.5 重组蛋白 rP-HSP90C 的分离纯化 28 1.6 重组蛋白 rP-HSP90 的浓度测定 28-29 1.7 重组蛋白 rP-HSP90C 的免疫活性分析 29-31 2. 核酸疫苗 pD-HSP90C 的构建及免疫活性分析 31-34 2.1 核酸疫苗 pD-HSP90C 的酶切鉴定结果 31 2.2 核酸疫苗 pD-HSP90C 插入基因片段的序列测定 31-32 2.3 核酸疫苗 pD-HSP90C 的免疫活性分析 32-34 第四章 讨论 34-36 1. 目的基因的选择 34 2. 重组蛋白 rP-HSP90C 的表达 34-35 3. 核酸疫苗 pD-HSP90C 的构建及免疫活性研究 35-36 结论 36-37 参考文献 37-40 附图 40-44 致谢 44