病毒感染的分子诊断.ppt

诺如病毒荧光探针法检测试剂盒全国首家获批诺如病毒核酸检测试剂盒第10页，共52页，星期日，2025年，2月5日诺如病毒核酸检测试剂盒（国械注准20153400293）（核酸类国内空白）人鼻病毒核酸检测试剂盒（国械注准20153400295）（国内空白）人博卡病毒核酸检测试剂盒（国械注准20153400294）（国际空白）第11页，共52页，星期日，2025年，2月5日眼部病毒感染多重real-timePCR检测试剂盒一个反应管中可同时检测肠道病毒、腺病毒、单纯疱疹病毒探针分别用FAM,HEX，CY3和CY5四种荧光标记的探针有内参，构建好了标准品，可进行绝对定量加入了UNG酶，可有效控制污染检出限可达1-10copies\ml成本仅为市售试剂盒的1/10效益成本比：TAKARARocheBio-RadThermo第12页，共52页，星期日，2025年，2月5日Fluorescence?InSitu?Hybridization(FISH)CarloForestaetal.,PLOSONE,2011ClareConnor,Nature,2008HPV感染第13页，共52页，星期日，2025年，2月5日FISH的优缺点及应用优点直接检测病变组织细胞标本，对疾病的诊断意义更大可检测病毒是否整合到人基因组缺点操作繁琐，对人员素质要求高需要单独的细胞培养间应用HPV,EBV,登革热病毒，HIV第14页，共52页，星期日，2025年，2月5日基于转录的扩增３种酶：逆转录酶、ＲＮＡ酶Ｈ和Ｔ７ＲＮＡ聚合酶２条特别设计的寡核苷酸引物恒温反应，不需要PCR仪能将病原体RNA扩增109倍，比常规PCR高２～３个数量级第15页，共52页，星期日，2025年，2月5日基于转录的扩增的优缺点及应用优点扩增时间短，恒温反应条件，不需要PCR仪在等温条件下，快速降解的RNA可极大减少扩增过程中污染的可能性缺点缺点是不能用于DNA病毒的检测以及多种酶混合体系的不稳定性应用在临床上应用于HCV、HIV、肠道病毒和呼吸道RNA病毒的检测第16页，共52页，星期日，2025年，2月5日loop-mediatedisothermalamplification（LAMP）第17页，共52页，星期日，2025年，2月5日LAMP的优缺点及应用优点等温扩增，不需PCR仪，可实现床旁或野外环境灵敏度和特异性均较高缺点引物设计极为复杂，研发门槛高，获批检测试剂盒少应用目前仅结核分枝杆菌获得CFDA认证，病毒检测尚处于研发阶段第18页，共52页，星期日，2025年，2月5日数字PCR第19页，共52页，星期日，2025年，2月5日数字PCR的优缺点及应用优点无需标准品，可直接进行绝对定量对标本中的抑制剂有较高耐受性为跨实验室比较提供绝对参照标准缺点样品分散技术的稳定性有待提高，且成本较高通量较低，目前通常能检测的信号为FAM和VIC应用目前仅用于科研，但在临床病毒检测和定量方面极具应用前景第20页，共52页，星期日，2025年，2月5日Sanger测序第21页，共52页，星期日，2025年，2月5日Sanger测序的优缺点及应用优点能对病毒进行分型、突变分析为病毒的传播路径等流行病学提供信息缺点通量低，一个反应体系只能分析一种病毒应用HBV、HCV、HIV、HSV、CMV、VZV、EBV、流感病毒等的抗病毒药物适用性分析第22页，共52页，星期日，2025年，2月5日深度测序第23页，共52页，星期日，2025年，2月5日深度测序的优缺点及应用优点不需要对标本中的病毒有预期判断，可以发现新发病毒感染通量高，可检测到标本中含量少的病毒对于无菌体液中发现的病毒诊断价值高缺点海量数据，分析有难度部分标本中发现的病毒不一定与疾病相关应用重症感染及新发突发传染病疫情，比如埃博拉病毒，寨卡病毒，H7N9均是通过深度测序被诊断发现第24页，共52页，星期日，2025年，2月5日法国梅里埃公司FilmArray?病原体全自动多重real-timePCR检测系统第25页，共52页，星期日，2025年，2月5日终点熔解曲线分析法国梅里埃公司FilmArray?病原体全自动多重real-timePCR技术原理第26页，共52页，星期日，2025年，2月5日FilmArray?呼吸道病原体检测组套美国FDA认证一个反应板能能同时检测呼吸道相关的17种病毒和3种细菌仅需2分钟将样本加入反应管中，剩下的病原体核酸提