出口活鱼泰妙菌素检测技术规范（征求意见稿）.doc

ICS ICS 备案号： SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN SN/T ××××—×××× 出口活鱼泰妙菌素检测技术规范 Guide of determination of Tiamulin in live fishes for export （征求意见稿） ××××-×× ××××-××-××实施 ××××-××-××发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 前 言 本标准依据GB/T1.1-2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则》、GB/T20001.4-2001《标准编写规则 第4部分：化学分析方法》和SN/T 0001-1995《出口商品中农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的基本规定》起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局。 本标准主要起草人： 出口活鱼泰妙菌素检测技术规范 １　范围 本标准规定了出口活鱼中泰妙菌素含量的高效液相色谱检测技术规范。 本标准适用于出口鲫鱼、鲈鱼、斑点叉尾鮰等活鱼泰妙菌素的检测。也可用于其他出口活鱼的的检测。 ２　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本 适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（ 包括所有的修改单） 适用于本文件。 SN/T 0376 出口水产品检验抽样方法 SN/T 0380 出口活鱼检验规程 3 制样 3.1 试样准备 试样按照SN/T 0376进行抽样，去掉鱼鳞、腮、皮、骨头，取可食肌肉部分，全部搅碎后混匀，均分作两份作为试样，分别装入洁净的容器，密封，标明标记。在制样操作过程中，应防止样品收到污染或发生残留物含量的变化。 3.2试样保存 将试样于4℃ 4 方法提要 样品经PBS缓冲液和乙酸乙酯混合提取,提取物加石油醚除脂,用HLB柱净化,通过淋洗去除柱上杂质，将目标物分离下来，氮吹后定容。以液相色谱测定，外标法定量。 5.试剂和材料 除另有说明外，所有试剂均为分析纯，水为超纯水。 5.1甲醇：高效液相色谱纯。 5.2乙腈：高效液相色谱纯。 5.3磷酸盐缓冲液：pH8.0。 5.4泰妙菌素标准贮备液 (100mg/L) :称取适量延胡索酸泰妙菌素 (纯度 99.8% ,德国Dr.E公司),用甲醇溶解并稀释至100mg/L储备液。 6.仪器和设备 6.1 液相色谱仪：配有DAD检测器。 6.2 分析天平：感量分别为0.0001g和0.01g。 6.3振荡器。 6.4离心机。 6.5恒温氮吹设备。 6.6涡旋混合器。 6.7 Oasis HLB固相萃取柱（60mg/3mL） 7 分析步骤　 称取(10±0.01)g试样于100mL离心管中,加10mL磷酸盐缓冲液(pH 8.0),均质2min。加入30mL乙酸乙酯,涡动1min。以5000r/min离心10min。取乙酸乙酯层于100mL鸡心瓶中。残渣用20mL乙酸乙酯重复提取一次。合并两次提取液。40℃ 旋转蒸发至近干,加入2mL0.1% 酒石酸转移至离心管，加入5mL石油醚，涡动 30s，离心5 min，弃上层。用5mL石油醚重复去脂一次。取Oasis HLB柱，依次用3mL甲醇、3mL 0.1% 酒石酸淋洗,将样品液过柱,加3mL 0.1%酒石酸淋洗、5mL甲醇洗脱。40℃下氮气吹干,加1.0mL 流动相充分溶解残渣,过 0.45μm滤膜， HPLC分析。 8 高效液相色谱测定 8.1 HPLC参考条件 a)色谱柱：ODS-3 C18 250mm*3.9mm,5 b)流动相：甲醇：0.1%磷酸水溶液（10+90） c)二极管阵列检测器，210 nm d)流速：1.0mL/min 8.2 色谱测定 分别进样5μL试样及标准工作溶液于高效液相色谱中，按8.1色谱条件进行色谱分析，响应值均应在仪器检测的线性范围内。对标准工作液和样液等体积参插进行测定，以外标法定量。 8.3空白试验 除不加样品外，按上述步骤进行平行操作。 8.4 结果计算和表述 用色谱工作站或按式（1）计算获得： X= A*c*V*1000/As*m*1000………(1) 式中： X-试样中目标物含量，单位（mg/kg）； A-样液中目标物的峰面积； c-标准溶液中目标物的浓度，单位（μg/m