DB15_T 3689-2024 荒漠肉从蓉愈伤组织生产技术规程.docx
ICS65.020.01CCSB38
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内蒙古自治区地方标准
DB15/T3689—2024
荒漠肉苁蓉愈伤组织生产技术规程
CodeofpeacticeofcallusproductionforCistanchedeserticolaMa
2024-10-25发布2024-11-25实施
内蒙古自治区市场监督管理局发布
DB15/T3689—2024
I
前言
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件由内蒙古自治区卫生健康委员会提出。
本文件由内蒙古自治区中药材（蒙药材）种植标准化技术委员会（SAM/TC54）归口。
本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、内蒙古医科大学附属医院。
本文件主要起草人：何江峰、王力伟、赵杰、安江红、房永雨、赵小庆、孙华、赵梦然、刘红葵。
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荒漠肉苁蓉愈伤组织生产技术规程
1范围
本文件规定了荒漠肉苁蓉的外植体采集、预处理、培养基配制、愈伤组织诱导及继代培养的方法。
本文件适用于荒漠肉苁蓉愈伤组织的生产。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
DB15/T1940西部沙樱组织培养技术规程
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
荒漠肉苁蓉CistanchedeserticolaY.C.Ma
列当科肉苁蓉属多年生的根寄生草本。
4材料准备
4.1材料选择
材料为寄生于梭梭（Haloxylonammodendron（C.A.Mey.）Bunge）根部的无病害、健壮的荒漠肉苁蓉带鳞叶的肉质茎。
4.2材料采集
4.2.1采集时间
春季苗刚出土时或冬季冻土之前采挖。
4.2.2采集地点
内蒙古阿拉善盟的梭梭林。
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4.2.3采集部位
采集地下部分，外观要求表皮及鳞片状叶呈乳白色。
4.2.4保藏方法
将采集部位埋进沙土中或放入保鲜袋，在4℃条件下保存，保持表面干燥，1个月内处理。
5试剂配制
5.1器皿灭菌
按照DB15/T1940执行。
5.2培养基配方
MurashigeandSkoog（MS）培养基为基础培养基，添加2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）2.0mg/L，赤霉素（GA3）1.0mg/L，聚乙烯吡咯烷酮（PVP）2.0g/L，6-糠氨基嘌呤（KT）0.5mg/L，蔗糖30.0g/L，琼脂7.0g/L。
5.3培养基配制
5.3.1试剂配制要求
试剂配制按照GB/T603规定方法配制，所用水执行GB/T6682的规定。
5.3.21MKOH溶液的配制
精确称取28.0gKOH粉末，用蒸馏水溶解，冷却至室温后，定容至500mL，现用现配。
5.3.31MHCl溶液的配制
精确量取43.86mL的市售38%盐酸，加蒸馏水，定容至500mL，现用现配。
5.3.42,4-D母液（2.0mg/mL）的配制
精确称取2,4-D粉末0.2g，加1.0mL1MKOH溶液，于90℃水浴加热助溶，冷却至室温后，用蒸馏水定容至100mL。将配制好的母液经0.22μm过滤灭菌器灭菌至100mL无菌试剂瓶中，放4℃冰箱，现用现配。
5.3.5GA3母液（1.0mg/mL）的配制
精确称取0.1gGA3粉末，加300μL无水乙醇助溶，用蒸馏水定容至100mL。将配制好的母液经0.22μm过滤灭菌器灭菌至100mL无菌试剂瓶中，放4℃冰箱，现用现配。
5.3.6KT母液（1.0mg/mL）的配制
精确称取KT粉末0.1g，加1.0mL1MKOH溶液助溶，用蒸馏水定容至100mL。将配制好的母液经0.22μm过滤灭菌器灭菌至100mL无菌试剂瓶中，放4℃冰箱，现用现配。
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5.3.71%次氯酸钠溶液的配制
精确量取100mL次氯酸钠溶液（分析纯，有效氯10%），用蒸馏水定容至1L，现用现配。
5.3.8培养基配制
精确称取4.7