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【小优细节君】焦亡研究之GSDMD检测经验分享

细胞焦亡是一种促炎性的细胞程序性死亡方式，通过对细胞焦亡的研究，有利于了解相关的感染性疾病，代谢性疾

病等发病机理，并为治愈这些疾病提供新的思路。之前小优细节君为大家介绍过焦亡相关的caspase-1和NLRP3蛋白

检测小tips，然而在焦亡通路中行使打孔功能的关键蛋白-GasderminD在检测时也时常会出现无条带，多杂带等让人

头痛不已的情况，今天，小优细节君就带大家一起来看一看WB实验中GSDMD检测难题的解决方案。

GSDMD的前世今生

在讨论实验方案之前，我们先来回顾下GSDMD的前世今生。GSDMD属于Gasdermin（GSDM）蛋白家族，除

GSDMD外，还包含GSDMA、GSDMB、GSDMC、GSDME/DNFA5和PVJK/GSDMF蛋白，是一组结构相关的新

型蛋白质。GSDM家族被认为与免疫反应相关的孔形成有关。具有C端抑制结构域、细胞毒性的N端结构域和柔性

连接结构域（GSDMF除外）。其中，GSDM-N端结构域可被剪切并释放出来，在细胞膜上形成大的寡聚孔，从而促

进细胞的分解。[1]

Fig.1Gasdermin家族成员

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目前的研究表明，GSDMs参与调控各种生理和病理过程，如细胞分化、凝血、炎症和肿瘤发生。蛋白GSDME和

GSDMA也与自身免疫性疾病和某些癌症有关。大多数GSDMs蛋白被认为具有形成孔隙的能力。其中研究最深入的

成员GSDMD蛋白已被确认为细胞焦亡的执行者[2]。焦亡是一种溶解性细胞死亡的炎症形式，它是在形成caspase-1

激活的炎症体后诱发的。其特点是一种由GSDM家族蛋白介导，激活NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎性体，形成

细胞膜孔，释放IL-1β和IL-18[3,4]。然后由促炎性Caspases通过经典和非经典炎性体信号通路裂解的GSDMD蛋

白生成GSDMD-N末端结构域（GSDMD-N），再由GSDMD-N迅速插入质膜形成活性孔[5,6]。因此，GSDMD-N充

当了细胞焦亡的最终执行者。

Fig.2GSDMD在焦亡中的作用方式

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实验细节

由于GSDMD在细胞焦亡和自身免疫性疾病的炎症中有可能存在作为驱动因素的潜力，是一个极具吸引力的药物

靶点，GSDMD成为目前研究的热点之一。今天小优细节君就来和大家一分享一下，WB实验中，检测GSDMD的一些

小经验。

在WB实验中，最常遇到的问题莫过于无条带和有杂带这两大类，下面我们展开说说。

01实验结果无GSDMD条带或信号很弱

GSDMD存在多种蛋白形式，包括约53kDa附近的GSDMD前体、约31kDa的剪切体GSDMD-N、约22kDa

的剪切体GSDMD-C等，在多数的情况下无需药物处理即可在样本中检测到GSDMD前体蛋白，虽然GSDMD在不同

的样本中广泛表达，但由于表达水平可能有差异或者受到一些处理方式的影响，在检测时也会有可能出现无条带或信号

弱的情况。这时我们可以先确定一下样本的表达水平，通过查询数据库、文献，或者进行qPCR实验作为参考。

相比较全长GSDMD蛋白的检测，GSDMD-N的检测难度则更大一些。从前文的介绍中，我们不难发现，GSDMD

的打孔功能主要是由N-端结构域执行的，而GSDMD-N