血清葡萄糖的测定.ppt

*************（GOD-POD法）实验九

血清葡萄糖浓度的测定CONTENTS相关临床知识12实验目的3实验原理4实验器材与试剂5实验操作1.相关临床知识血液中的葡萄糖称为血糖。空腹血糖3.9-6.1mmol/L01正常餐后两小时02糖尿病03空腹04餐后两小时050mmol/L≦061mmol/L≦071.相关临床知识1.相关临床知识胰岛B细胞靶细胞胰岛素有些患者血糖含量并不稳定，有什么办法进一步更准确诊断？别名：青年发病型糖尿病I型糖尿病（T1DM）原因：胰腺产生胰岛素的细胞已经彻底损坏。易发病人群：年龄轻，大多30岁治疗：依赖胰岛素治疗或胰岛素依赖性糖尿病。别名：非胰岛素依赖型糖尿病原因：自身能产生胰岛素，但细胞无法对其做出反应。易发病人群：中老年人，肥胖者治疗：需要胰岛素单独或与口服药联合应用的治疗II型糖尿病（T2DM）1.相关临床知识原理：正常人进食糖类后血糖会暂时升高，0.5~1小时后升到最高峰，但不超过8.9mmol/L，2小时后回到空腹水平。概念：是一种葡萄糖负荷试验，用以了解胰岛β细胞功能和机体对血糖的调节能力，是诊断糖尿病的确诊试验口服葡萄糖耐量试验（OGTT）1.相关临床知识OGTT操作步骤1）.试验前3天内，每日碳水化合物摄入量不少于150g。2）.空腹取血后，5分钟内口服溶于250~300ml水内的75g无水葡萄糖粉的糖水，妊娠妇女用量为100g，儿童按1.75g/kg体重给予，不超过75g.3）.服糖后半小时、1小时、2小时、3小时分别在前臂采血测血糖,采血同时，每隔1小时取尿液作尿糖试验。试验过程中，受试者不喝茶及咖啡，不吸烟，不做剧烈运动4）.OGTT2小时后血糖≥11.1mmol／L可以确诊糖尿病当静脉空腹血糖＜6.1mmol／L，OGTT2小时血糖＜7.8mmol／L，说明人体对进食葡萄糖后的血糖调节能力正常。01020304OGTT诊断当静脉空腹血糖≥7.0mmol／L或OGTT2小时血糖≥11.1mmol／L，说明人体处理进食后葡萄糖的能力明显降低，可以确诊糖尿病。当静脉空腹血糖＜7.0mmol／L，并且OGTT2小时血糖介于7.8～11.1mmol／L之间，说明人体对葡萄糖的调节能力轻度下降，可以诊断糖耐量减低。当静脉空腹血糖介于6.1～7.0mmol／L之间，且OGTT2小时血糖≤7.8mmol／L，说明人体对进食葡萄糖后的血糖调节能力尚好，但对空腹血糖调节能力轻度减退，可以诊断空腹血糖受损。1.相关临床知识掌握酶法测定血清葡萄糖浓度的原理掌握血糖变化的临床意义2.实验目的3.实验原理血糖测定的方法有哪些？（一）无机化学法：Folin-Wu法，基于葡萄糖醛基的还原性（二）有机化学法：邻甲笨胺法，联笨胺法等（三）酶法Cu2+OH-GluCu+磷钼酸显色1.己糖激酶法（HK）2.葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法）邻甲笨胺+Glu葡萄糖基胺蓝绿色化合物分子重排脱水希夫氏碱缩合特异性差3.实验原理葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法）葡萄糖酸+2H2O2GOD红色醌类化合物POD葡萄糖氧化酶（GOD）将葡萄糖氧化为葡萄糖酸酶，同时释放过氧化氢。过氧化氢酶（POD）催化过氧化氢氧化色素原（如4-氨基安替比林和苯酚），并使色素原氧化成红色醌类化合物，即Trinder反应。葡萄糖+O2+H2O01红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。2H2O2+4-氨基安替比林+苯酚025ml移液管，微量可调式移液管，721E分光计，37℃恒温水浴(一）器材01苯甲酸钠溶液（12mmol/L）酶酚混合试剂酶试剂+酚溶液1:1葡萄糖标准工作液（5mmol/L）防止氧化，葡萄糖为单糖,含醛基,易氧化成羧基（二）试剂024.实验器材和试剂*************