配子和胚胎的冷冻及复苏规范.ppt

四、冷冻的步骤适应症胚胎的选择慢速冷冻快速冷冻第30页，共49页，星期日，2025年，2月5日胚胎冷冻的适应症保存移植后剩余的胚胎有OHSS危险患者的胚胎接受赠卵由于突发疾病或其它原因暂时不能移植保存生育功能第31页，共49页，星期日，2025年，2月5日胚胎的选择符合移植或冷冻标准的胚胎囊胚形成率48～51％，不符合者囊胚形成率41.7％(FertilSteril2000,74:495,humreprod1998,13:2869)第32页，共49页，星期日，2025年，2月5日胚胎的选择(碎片）组别继续培养胚胎数囊胚形成数囊胚形成率％≤5％2807225.75≤20%1092724.820≤50%851315.350%53611.3合计52711822.4P0.01第33页，共49页，星期日，2025年，2月5日胚胎的选择（细胞数）细胞数培养胚胎数囊胚数囊胚形成率％410232.94~63349428.16381539.5合计47411223.6P0.01第34页，共49页，星期日，2025年，2月5日胚胎的选择（发育速度）发育速度胚胎数囊胚数囊胚形成率％停滞2142813.1迟缓2608432.3合计47411223.6不符合冷冻标准胚胎继续培养形成囊胚冷冻复苏31例，移植17例，3例妊娠第35页，共49页，星期日，2025年，2月5日第1页，共49页，星期日，2025年，2月5日冷冻是保存组织和细胞重要方法

（低温医学）体外培养1年干冰－79℃数月液氮－196℃永久保存分子运动，生理生化反应停止，任何损伤也无法修复自发突变率1％第2页，共49页，星期日，2025年，2月5日一、冷冻对细胞的损伤

(37℃－196℃)冷冻危险区（-15℃—-50℃）冰晶形成溶液效应渗性休克保护剂毒性寒冷第3页，共49页，星期日，2025年，2月5日冰晶形成特点有结构六角形晶体只与水分子结合，排除其它溶质先形成冰核，同质成核－35℃－40℃，异质成核－10℃－15℃（过冷）一旦冰核形成，冰晶迅速增大密度变小，体积增大第4页，共49页，星期日，2025年，2月5日1.冰晶形成及对细胞的损伤体积增大产生压力，冰晶穿孔胞浆渗漏细胞内物质分布改变结晶只与水分子结合，排斥其它任何溶质，随着冰晶的增大，像犁一样将细胞的其它成分挤在狭小的空间，细胞内间隙缩小，细胞内成分相互接触，发生不正常反应溶质浓度上升，结晶析出，PH变化，蛋白质可溶性降低，有害物质浓度升高复苏后局部低渗，结晶的溶质不会再溶解复苏气泡形成，冷冻速率快，气泡多而小，含碳酸盐严重第5页，共49页，星期日，2025年，2月5日2.细胞外溶液效应细胞悬浮在溶液中慢速冷冻细胞外液结冰导致细胞外渗透压上升是细胞脱水的关键脱水太慢，溶液浓度过高对细胞内蛋白有毒性，（脂蛋白变性，细胞达到最小体积以下）第6页，共49页，星期日，2025年，2月5日0.16M－5MOoo第7页，共49页，星期日，2025年，2月5日3.渗性休克复苏时细胞外冰融化造成低渗，细胞内渗透压高，细胞外水进入细胞内过快，细胞肿胀第8页，共49页，星期日，2025年，2月5日4.渗性保护剂的毒性溶液浓度，暴露时间和温度越高毒性越大不同种类渗性保护剂毒性的差别种类已二醇甘油二甲亚砜丙二醇已酰胺胚胎发育能力％988868160第9页，共49页，星期日，2025年，2月5日5.寒冷对细胞的损伤37℃—0℃寒冷损伤,20℃～0℃细胞膜双层脂质结构，含水30％～50％,其余为脂蛋白，对寒冷敏感，低温脂类变硬，脂蛋白分解，变性脂质的含量和成分影响细胞对冷冻的耐受性脂质含量丰富的牛、猪卵母细胞易受寒冷的损伤，卵磷脂/胆固醇比值大，柔韧性好，耐受冷冻第10页，共49页，星期日，2025年，2月5日二、预防冷冻损伤的方法冷冻保护剂——渗性，非渗性，大分子控制冷冻和复苏的速率－细胞种类，温度快速去除冷冻保护剂第11页，共49页，星期日，2025年，2月5日（一）冷冻保护剂的种类和作用1.渗性2.非渗性3.大分子第12页，共49页，星期日，2025年，2月5日1.渗性保护剂的作用无限降低冰点（1000g水＋1mol溶质冰点降低